2. 沉淀

將樣品體積的 3-4 倍的裂解溶劑添加到孔中以沉淀蛋白質(zhì)。

• 推薦溶劑

• 1% 甲酸的乙腈溶液

替代溶劑：1% 甲酸的甲醇溶液

3. 混合

在洗脫前混合兩種溶液以使蛋白質(zhì)沉淀。

選項(xiàng) 1 - 吸液（推薦）：

用手動、自動移液器或自動液體處理系統(tǒng)上下吸液 3 – 4 次。

選項(xiàng) 2 - 渦旋

建議采用高速混合以獲得最佳的均質(zhì)蛋白質(zhì)沉淀，同時確保孔之間不會發(fā)生飛濺和污染風(fēng)險(xiǎn)。

4. 洗脫

與傳統(tǒng)的松散填充產(chǎn)品相比，Microolute^TM PLR 不需要高真空或壓力即可高效、均勻地洗脫樣品*。

對于真空：

施加低于 - 0.1 bar 的真空，持續(xù)3分鐘或直至樣品洗脫完畢。

對于正壓：

施加小于 3 PSI 的正壓，持續(xù)3分鐘或直至樣品洗脫完畢。

注意：如果磷脂去除或清理不充分，請降低真空或壓力以減慢流速。

*較高的洗脫真空或壓力可能導(dǎo)致磷脂去除效率低下，并可能增加其他基質(zhì)成分（例如蛋白質(zhì)）滲透到樣品中的風(fēng)險(xiǎn)。

5. 分析

將洗脫液直接注入到 LC 中，進(jìn)樣前稀釋或蒸發(fā)洗脫液以在進(jìn)樣前重新溶解為更適合分析的溶劑。